Varmstart Bst 2.0 DNA-polymeras (glycerolfri)
Bst DNA-polymeras V2 härrör från Bacillus stearothermophilus DNA-polymeras I, som har 5'→3' DNA-polymerasaktivitet och stark kedjeersättningsaktivitet, men ingen 5'→3'-exonukleasaktivitet.Bst DNA Polymerase V2 är idealiskt lämplig för strängförskjutning, isotermisk amplifiering LAMP (loopmedierad isotermisk amplifiering) och snabb sekvensering.Bst DNA-polymeras V2 är en varmstartversion baserad på Bst DNA-polymeras V2 (HC5005A) erhållen genom reversibel modifieringsteknologi, som kan hämma DNA-polymerasaktivitet vid rumstemperatur, så reaktionssystemet kan drivas och formuleras vid rumstemperatur för att förhindra icke -specifik amplifiering och förbättra reaktionseffektiviteten, och denna version kan lyofiliseras.Dessutom frigörs dess aktivitet vid höga temperaturer, så det finns inget behov av ett separat aktiveringssteg.
Komponenter
| Komponent | HC5006A-01 | HC5006A-02 | HC5006A-03 |
Bst DNA-polymeras V2 (glycerolfri) (8 U/μL) | 0,2 ml | 1 ml | 10 ml |
| 10×HC Bst V2-buffert | 1,5 ml | 2×1,5 ml | 3×10 ml |
| MgSO4(100 mm) | 1,5 ml | 2×1,5 ml | 2×10 ml |
Ansökningar
1.LAMP isotermisk amplifiering
2.DNA-strängs enkelförskjutningsreaktion
3.Hög GC-gensekvensering
4.DNA-sekvensering av nanogramnivå.
Lagringstillstånd
Transport under 0°C och förvaras vid -25°C~-15°C.
Enhetsdefinition
En enhet definieras som mängden enzym som införlivar 25 nmol dNTP i syraolösligt material på 30 minuter vid 65°C.
Kvalitetskontroll
1.Proteinrenhetsanalys (SDS-PAGE):Renheten hos Bst DNA-polymeras V2 är ≥99 % bestämd genom SDS-PAGE-analys med användning av Coomassie Blue-detektion.
2.EndonukleasAktivitet:Inkubation av en 50 μL reaktion innehållande minst 8 U av Bst DNA-polymeras V2 med 1 μg λDNA under 16 timmar vid 37 ℃ resulterar i ingen detekterbar nedbrytning enligt bestämningen.
3.Exonukleasaktivitet:Inkubation av en 50 μL reaktion innehållande minst 8 U Bst DNA-polymeras V2 med 1 μg λ -Hind Ⅲ-digererad DNA i 16 timmar vid 37 ℃ resulterar i ingen detekterbar nedbrytning enligt bestämningen.
4.Nickase-aktivitet:Inkubation av en 50 μL reaktion innehållande minst 8 U av Bst DNA-polymeras V2 med 1 μg pBR322 DNA under 16 timmar vid 37°C resulterar i ingen detekterbar nedbrytning enligt bestämningen.
5.RNase-aktivitet:Inkubation av en 50 μL reaktion innehållande minst 8 U av Bst DNA-polymeras V2 med 1,6 μg MS2 RNA under 16 timmar vid 37 °C resulterar i ingen detekterbar nedbrytning enligt bestämningen.
6.E coliDNA:120 U av Bst DNA-polymeras V2 screenas för närvaron av E. coli genomiskt DNA med TaqMan qPCR med primrar specifika för E. coli 16S rRNA-lokus.E. coli genomiska DNA-kontamination är ≤1 kopia.
LAMPREaktion
| Komponenter | 25μL |
| 10×HC Bst V2-buffert | 2,5 μL |
| MgSO4 (100 mm) | 1,5 μL |
| dNTP (10 mM vardera) | 3,5 μL |
| SYTO™ 16 grön (25×)a | 1,0 μL |
| Primerblandningb | 6 μL |
| Bst DNA-polymeras V2 (glycerolfri) (8 U/uL) | 1 μL |
| Mall | × μL |
| ddH2O | Upp till 25 μL |
Anmärkningar:
1) a.SYTOTM 16 Grön (25×): Enligt experimentella behov kan andra färgämnen användas som substitut;
2) b.Primerblandning: erhålls genom att blanda 20 µM FIP, 20 µM BIP, 2,5 µM F3, 2,5 µM B3, 5 µM LF, 5 µM LB och andra volymer.
Reaktion och tillstånd
1 × HC Bst V2-buffert, inkubationstemperaturen är mellan 60°C och 65°C.
Värmeinaktivering
80°C, 20 min
