Wild Taq DNA-polymeras
Taq DNA-polymeras är ett termostabilt DNA-polymeras från Thermus aquaticus YT-1, som har en 5′→3′-polymerasaktivitet och en 5′-fliks endonukleasaktivitet.
Komponenter
| Komponent | HC1010A-01 | HC1010A-02 | HC1010A-03 | HC1010A-04 |
| 10× Taq-buffert | 2×1 ml | 2×10 ml | 2×50 ml | 5×200 ml |
| Taq DNA-polymeras (5 U/μL) | 0,1 ml | 1 ml | 5 ml | 5×10 ml |
Lagringstillstånd
Transport under 0°C och förvaras vid -25°C~-15°C.
Enhetsdefinition
En enhet definieras som mängden enzym som införlivar 15 nmol dNTP i syraolösligt material på 30 minuter vid 75°C.
Kvalitetskontroll
1.Proteinrenhetsanalys (SDS-PAGE):Renheten hos Taq DNA-polymeras var ≥95 % bestämd genom SDS-PAGE-analys.
2.Endonuclease-aktivitet:Minst 5 U Taq DNA-polymeras med 1 μg λDNA under 16 timmar vid 37 ℃ resulterar i ingen detekterbar nedbrytning enligt bestämningen.
3.Exonukleasaktivitet:Minst 5 U Taq DNA-polymeras med 1 μg λ -Hind Ⅲ-digererad DNA under 16 timmar vid 37 ℃ resulterar i ingen detekterbar nedbrytning enligt bestämningen.
4.Nickase-aktivitet:Minst 5 U Taq DNA-polymeras med 1 μg pBR322-DNA under 16 timmar vid 37°C resulterar i ingen detekterbar nedbrytning enligt bestämningen.
5.RNase-aktivitet:Minst 5 U Taq DNA-polymeras med 1,6 μg MS2 RNA under 16 timmar vid 37°C resulterar i ingen detekterbar nedbrytning enligt bestämningen.
6.E coliDNA:5 U Taq DNA-polymeras screenas för närvaron av E. coli genomiskt DNA med TaqMan qPCR med primrar specifika för E. coli 16S rRNA-lokus.E. coli genomiska DNA-kontamination är ≤1 kopia.
7.PCR-amplifiering (5,0 kb lambda-DNA)- En reaktion på 50 µL innehållande 5 ng Lambda-DNA med 5 enheter Taq DNA-polymeras under 25 cykler av PCR-amplifiering resulterar i den förväntade produkten på 5,0 kb.
Reaktionsinställningar
| Komponenter | Volym |
| Mall-DNAa | frivillig |
| 10 μM Forward Primer | 1 μL |
| 10 μM Reverse Primer | 1 μL |
| dNTP-mix (10 mM vardera) | 1 μL |
| 10×Taq-buffert | 5 μL |
| Taq DNA-polymerasb | 0,25 μL |
| Nukleasfritt vatten | Upp till 50 μL |
Anmärkningar:
1) Den optimala reaktionskoncentrationen för olika mallar är olika.Följande tabell visar den rekommenderade mallanvändningen för 50 µL reaktionssystem.
| DNA | Belopp |
| Genomisk | 1 ng-1 μg |
| Plasmid eller viral | 1 pg-1 ng |
2) Den optimala koncentrationen av Taq DNA-polymeras kan variera från 0,25 µL~1 µL i specialiserade applikationer.
ReaktionProgram
| Steg | Temperatur(°C) | Tid | Cyklar |
| Initial denatureringa | 95 ℃ | 5 min | - |
| Denaturering | 95 ℃ | 15-30 s | 30-35 cykler |
| Glödgningb | 60 ℃ | 15 s | |
| Förlängning | 72 ℃ | 1 kb/min | |
| Slutlig förlängning | 72 ℃ | 5 min | - |
Anmärkningar:
1) Det initiala denatureringsvillkoret är lämpligt för de flesta amplifieringsreaktioner och kan modifieras i enlighet med komplexiteten i mallstrukturen.Om mallstrukturen är komplex kan fördenatureringstiden förlängas till 5 – 10 minuter för att förbättra den initiala denatureringseffekten.
2) Glödgningstemperaturen måste justeras i enlighet med primerns Tm-värde, som vanligtvis är inställt på 3~5 ℃ lägre än primerns Tm-värde;För komplexa mallar är det nödvändigt att justera glödgningstemperaturen och förlänga förlängningstiden för att uppnå effektiv förstärkning.
