Robustart Taq DNA Polymerase
Robustart Taq DNA-polymeras är ett varmstarts-DNA-polymeras.Denna produkt kan inte bara bättre hämma den ospecifika reaktionen som orsakas av den ospecifika hybridiseringen av primrar eller primeraggregation i processen för beredning och amplifiering av PCR-system.Därför har den utmärkt specificitet och är mer effektiv för amplifiering av mallar med låg koncentration, och den är lämplig för multiplexerad PCR-amplifieringsreaktion.Dessutom har denna produkt mycket god tillämpbarhet och stabila amplifieringsresultat kan erhållas i olika typer av PCR-reaktioner.
Komponenter
1.5 U/μL Robustart Taq DNA-polymeras
2.10 × PCR-buffert II (Mg²+ fri) (valfritt)
3.25 mM MgCl2(frivillig)
* 10 × PCR-buffert II (Mg²+ fri) innehåller inte dNTP och Mg²+, lägg till dNTP och MgCl2vid framställning av reaktionssystemet.
Rekommenderade applikationer
1.Snabb förstärkning.
2.Multipel förstärkning.
3.Direkt amplifiering av blod, pinnprover och andra prover.
4.Detektering av luftvägssjukdomar.
Lagringstillstånd
-20°C för långtidsförvaring, bör blandas väl före användning, undvik frekvent frys-upptining.
*Om nederbörd sker efter kylning är det normalt;det rekommenderas att utjämnas till rumstemperatur före blandning och användning.
Enhetsdefinition
En aktiv enhet (U) definieras som mängden enzym som införlivar 10 nmol deoxiribonukleotid i syraolösligt material vid 74°C under 30 minuter med användning av aktiverat laxsperma-DNA som mall/primer.
Kvalitetskontroll
1.SDS-PAGE elektroforetisk renhet större än 98%.
2.Amplifieringskänslighet, batch-till-batch-kontroll, stabilitet.
3.Ingen exogen nukleasaktivitet, ingen exogen endonukleas eller exonukleaskontamination
Instruktioner
Reaktionsinställningar
| Komponenter | Volym (μL) | Slutlig koncentration |
| 10 × PCR-buffert II (Mg²+ fri)a | 5 | 1× |
| dNTP (10 mM varje dNTP) | 1 | 200 μM |
| 25 mM MgCl2 | 2-8 | 1-4 mM |
| Robustart Taq DNA Polymerase (5U/μL) | 0,25-0,5 | 1,25-2,5 U |
| 25 × Primer mixb | 2 | 1× |
| Mall | - | ＜ 1 μg/reaktion |
| ddH2O | Till 50 | - |
Anmärkningar:
1) a.Bufferten innehåller inte dNTP och Mg²+, lägg till dNTP och MgCl2vid framställning av reaktionssystemet.
2) b.Om det används för qPCR/qRT-PCR, bör fluorescerande prober läggas till reaktionssystemet.Vanligtvis ger en slutlig primerkoncentration på 0,2 μM bra resultat;om reaktionsprestanda är dålig kan primerkoncentrationen justeras i intervallet 0,2-1 μM.Sondkoncentrationen är vanligtvis optimerad inom intervallet 0,1-0,3 μM.Koncentrationsgradientexperiment kan utföras för att hitta den bästa kombinationen av primer och sond.
Termiskt cykelprotokoll
| Vanlig PCRbearbeta | |||
| Steg | Temperatur | Tid | Cyklar |
| Fördenaturering | 95 ℃ | 1-5 min | 1 |
| Denaturering | 95 ℃ | 10-20 sek | 40-50 |
| Glödgning / förlängning | 56-64 ℃ | 20-60 sek | |
| Snabb PCRbearbeta | |||
| Steg | Temperatur | Tid | Cyklar |
| Fördenaturering | 95 ℃ | 30 sek | 1 |
| Denaturering | 95 ℃ | 1-5 sek | 40-45 |
| Glödgning / förlängning | 56-64 ℃ | 5-20 sek | |
Anteckningar
1.Amplifieringshastigheten för snabbt DNA-polymeras bör inte vara mindre än 1 kb/10 s.Temperaturstegrings- och fallhastigheten, temperaturkontrollläget och värmeledningseffektiviteten för olika PCR-instrument varierar mycket, så det rekommenderas att optimera de optimala reaktionsförhållandena för det specifika snabba PCR-instrumentet.
2.Systemet är mycket anpassningsbart, med högre specificitet och känslighet.
3.Lämplig för användning som högkänsliga PCR-detektionsreagenser och kan användas i multiplex PCR-amplifieringsreaktioner.
4.5'→3'-polymerasaktivitet, 5'→3' exonukleasaktivitet;ingen 3'→5' exonukleasaktivitet;ingen korrekturfunktion.
5.Lämplig för kvalitativ och kvantitativ testning av PCR och RT-PCR.
6.3'-änden av PCR-produkten är A, som kan klonas direkt in i en T-vektor.
7.Trestegsmetoden rekommenderas för primrar med låga hybridiseringstemperaturer eller för amplifiering av fragment längre än 200 bp.
