rnashämmare (glycerolfri)
Murin RNas-inhibitor är en rekombinant murin RNas-inhibitor uttryckt och renad från E.coli.Det binder till RNas A, B eller C i ett 1:1-förhållande genom icke-kovalent bindning, vilket hämmar aktiviteten hos de tre enzymerna och skyddar RNA från nedbrytning.Det är dock inte effektivt mot RNase 1, RNase T1, S1 Nuclease, RNase H eller RNase från Aspergillus.Murin RNas-hämmare testades med RT-PCR, RT-qPCR och IVT mRNA och var kompatibel med olika kommersiella omvända transkriptaser, DNA-polymeraser och RNA-polymeraser.
Jämfört med humana RNas-hämmare innehåller murin RNas-inhibitor inte två cysteiner som är mycket känsliga för oxidation som orsakar inaktivering av inhibitorn.Det gör den stabil vid låga koncentrationer av DTT (mindre än 1 mM).Denna funktion gör den lämplig för användning i reaktioner där höga koncentrationer av DTT är negativa för reaktionen (t.ex. realtids RT-PCR).
Atillämpning
Denna produkt kan användas i stor utsträckning i alla experiment där RNas-interferens är möjlig för att undvika RNA-nedbrytning, såsom:
1. Första-strängs cDNA-syntes, RT-PCR, RT-qPCR, etc.;
2. Skydda RNA från nedbrytning i in vitro transkription/translation (t.ex. viral replikation in vitro);
3. Inhibering av RNas-aktivitet under RNA-isolering och rening.
Förvaringsförhållanden
Förvara vid -25～-15℃;
Frys-tinningscykler ≤ 5 gånger;
Gäller i 1 år.
Enhetsdefinition
En enhet definieras som mängden RNas-inhibitor som krävs för att hämma aktiviteten av 5 ng RNas A med 50 %.
Molekylvikt
RNase Inhibitor (glycerolfri) är ett 50 kDa protein.
Kvalitetskontroll
Exonukleas Aktivitet:
Inkubation av 40 U enzym med 1 μg λ-Hind III-digererad DNA under 16 timmar vid 37°C resulterade i ingen detekterbar nedbrytning av DNA:t som bestämdes med gelelektrofores.
Endonukleasaktivitet:
Inkubation av 40 U enzym med 1 μg λ DNA under 16 timmar vid 37°C resulterade i ingen detekterbar nedbrytning av DNA:t som bestämts genom gelelektrofores.
Nicking Aktivitet:
Inkubation av 40 U enzym med 1 μg pBR322 under 16 timmar vid 37 ℃ resulterade i ingen detekterbar nedbrytning av DNA:t som bestämts genom gelelektrofores.
RNase Aktivitet:
Inkubation av 40 U enzym med 1,6 μg MS2 RNA under 4 timmar vid 37 ℃ resulterade i ingen detekterbar nedbrytning av RNA:t som bestämdes med gelelektrofores.
E.coli DNA:
40 U enzym detekteras av TaqMan qPCR.E.coli DNA är ≤ 0,1 pg/40U.
Nanmärknings
1. Skaka inte eller rör om våldsamt för att förhindra enzyminaktivering.
2.RNashämmare är aktiv vid temperaturer från 25℃ till 55℃ och inaktiveras vid ≥65℃.
3. Aktiviteten av RNase H, RNase 1 och RNase T1 hämmas inte.
4. pH-intervallet för att hämma RNas-aktivitet är brett (aktivt vid pH 5-9), uppvisar maximal aktivitet vid pH 7-8.
