Multiplex One Step RT-qPCR Premix-UNG
Kat.nr: HCB5145A
Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG Plus) är ett multiplex kvantitativt PCR-kit baserat på RNA som mall.Under experimentets gång utfördes omvänd transkription och kvantitativ PCR i samma rör, vilket förenklade den experimentella operationen och minskade risken för kontaminering.I detta kit syntetiserades den första strängens cDNA effektivt med värmebeständigt omvänt transkriptas och amplifierades kvantitativt med HotStart Tag DNA Polymerase.Satsen innehåller huvudsakligen optimerad MP-buffert, enzymblandning etc. Buffertlösningen innehåller redan Mg2+och dNTP.Dessutom tillkommer de faktorer som effektivt kan hämma den icke-specifika PCR-amplifieringen och förbättra amplifieringseffektiviteten för flera qPCR-reaktioner, vilket kan säkerställa amplifieringseffektiviteten och utföra upp till multipla amplifieringsreaktioner.dUTP/UDG-systemet lades till för att effektivt förhindra risken för aerosolkontamination.
Komponenter
1. Buffert
2. Enzymblandning
Specifikation
| Hot Start | Inbyggd varmstart |
| Detektionsmetod | Primer-probe-detektion |
| PCR-metod | Ett steg RT-qPCR |
| Polymeras | Taq DNA-polymeras |
| Typ av prov | DNA |
Förvaringsförhållanden
Produkten levereras med torris och kan lagras vid -25~-15℃ i 1 år.Det bör undvikas oftafrysa-tina.Det rekommenderas att spara separat.
Instruktioner
1.Reaktion Systemet
| Komponenter | Volym (μL) | Slutlig koncentration |
| 2 × MP-buffert | 12.5 | 1× |
| Enzymmix | 1 | - |
| Primer/Sondmix (2,5 μM) | 3 | 0,3 μM |
| Mall RNA | 1-10 | - |
| RNase-fritt H2O | till 25 | - |
Anmärkningar:
Var noga med att blanda väl före användning, undvik alltför stora bubblor orsakade av våldsamma vibrationer.
a.Primerkoncentration: Primerblandning inklusive multiplexprimer, beroende på situationen kan optimal primerkoncentration vara mellan 0,l och 1,0μM.
b.Sondkoncentration: Sondblandning inklusive multiplex sondmärkning av skillnaden fluorescerande grupp, beroende på situationen kan den optimala sondkoncentrationen vara mellan 0,05 och 0,5 μM.
c.Mallutspädning: qPCR är mycket känslig och det rekommenderas att späda mallen.Kontroll Ct-värdet är lämpligt mellan 20 och 35.
d.Systemförberedelse: Förbered i det ultrarena arbetsbordet och pipett och reaktionsrör utan nukleasrester;det rekommenderas att använda pistolhuvudet med filterelement.Undvik korskontaminering och aerosolkontamination.
2. Optimerad cyklingProtokoll
| Cykel steg | Temp. | Tid | Cyklar |
| Omvänd transkription | 50 ℃a | 20 minuter | 1 |
| Initial-denaturering | 95 ℃ | 5 min | 1 |
| Amplifieringsreaktion | 95 ℃ | 15 sek |
40-45 |
| 60 ℃ b | 30 sek c |
Anmärkningar:
a.Omvänd transkription: Temperaturen kan väljas mellan 42°C eller 50°C.
b.Amplifieringsreaktion: Temperaturen justeras enligt Tm-värdet för de designade primrarna.
c.Fluorescenssignalförvärv: Ställ in experimentproceduren enligt kraven i instrumenthandboken.
Anteckningar
Vänligen använd nödvändig personlig skyddsutrustning, såsom labbrock och handskar, för att säkerställa din hälsa och säkerhet.
