2×HiF Taq plus Master Mix
Kat.nr: HCR2014B
HIF Taq plus Master Mix (med färgämne) är en färdigblandad 2x-lösning som innehåller Plus HIF DNA-polymeras, dNTPs och optimerad buffert.Två monoklonala antikroppar vid rumstemperatur som hämmar polymerasaktivitet och 3′→5′exonukleasaktivitet läggs till mastermixen för enkel och mycket specifik Hot Start PCR.Förlängningsfaktorn läggs till mastermixen för att ge enzymet en lång fragmentförstärkningskapacitet, längden på amplifieringen kan vara upp till 13 kb, enzymet har en 5′→3′ DNA-polymerasaktivitet och en 3′→5′ exonukleasaktivitet, dess trohet är 83 gånger högre än för Taq DNA-polymeras, vilket är 9 gånger så högt som för vanligt DNA-polymeras.Den är lämplig för amplifiering av komplexa mallar, amplifieringsprodukten är en trubbig ände.
2×HIF Taq plus Master Mix(With Dye) har fördelarna av snabbt och enkelt, hög känslighet, stark specificitet, bra stabilitet, etc., reaktionssystemet behöver bara lägga till primers och mallar, och kan amplifieras med en två- stegprotokoll, förenklar de experimentella stegen och sparar tid.Denna produkt innehåller elektroforesindikatorfärgämnen och PCR-produkter kan användas direkt för elektrofores.Dessutom innehåller produkten även ett specifikt skyddsmedel, så att mastermixen kan bibehålla stabil aktivitet efter upprepad frysning-upptining.
Förvaringsförhållanden
Produkter bör förvaras vid -25~-15 ℃ i 1 år.
Specifikationer
| Produktspecifikation | Master Mix |
| Koncentration | 2× |
| Hot Start | Inbyggd Hot Start |
| Hänga över | Trubbig |
| Reaktionshastighet | Snabb |
| Storlek (slutprodukt) | Upp till 13kb |
| Villkor för transport | Torris |
| Produkttyp | High fidelity PCR-premixer |
Instruktioner
1.PCR-reaktionssystem
| Komponenter | Volym (μL) |
| DNA-mall | Lämplig |
| Forward primer (10 μmol/L) | 2.5 |
| Omvänd primer (10 μmol/L) | 2.5 |
| 2×HIF Taq plus Master Mix | 25 |
| ddH2O | till 50 |
2.Rekommenderad användning av olika mallar
| Typ av mall | Amplifiera fragment från 1 kb till 10 kb |
| Genomiskt DNA | 50 ng-200 ng |
| Plasmid eller viralt DNA | 10pg-20ng |
| cDNA | 1-2,5 µL (Överskrid inte 10 % av den slutliga PCR-reaktionsvolymen) |
3.Amplifieringsprotokoll
1) Tvåstegsprotokoll (komplexitetsmall)
| Cykelsteg | Temp. | Tid | Cyklar |
| Initial denaturering | 98℃ | 3 min | 1 |
| Denaturering | 98℃ | 10 sek | 30-35 |
| Förlängning | 68℃ | 30 sek/kb | |
| Slutlig förlängning | 72℃ | 5 min | 1 |
2) Trestegsprotokoll (vanligt protokoll)
| Cykelsteg | Temp. | Tid | Cyklar |
| Initial denaturering | 98℃ | 3 min | 1 |
| Denaturering | 98℃ | 10 sek | 30-35 |
| Glödgning | 60 ℃ | 20 sek | |
| Förlängning | 72℃ | 30 sek/kb | |
| Slutlig förlängning | 72℃ | 5 min | 1 |
3) Glödgningsgradientprotokoll (komplexitetsmall)
| Cykelsteg | Temperatur | Tid | Cyklar |
| Initial denaturering | 98℃ | 3 min | 1 |
| Denaturering | 98℃ | 10 sek | 15 (1℃ minskning per cykel) |
| Gradientglödgning | 70-55 ℃ | 20 sek | |
| Förlängning | 72℃ | 30 sek/kb | |
| Denaturering | 98℃ | 10 sek |
20 |
| Glödgning | 55 ℃ | 20 sek | |
| Förlängning | 72℃ | 30 sek/kb | |
| Slutlig förlängning | 72℃ | 5 min | 1 |
Funktioner under olika förstärkningsprotokoll
| Protokol | Två steg | Tresteg | Gradientglödgning |
| Spec. | snabb | medium | långsam |
| Specificitet | hög | medium | hög |
| PCR-utbyte | medium | hög | medium |
| Detektionshastighet | hög | medium | hög |
Anteckningar
Vänligen använd nödvändig personlig skyddsutrustning, sådana labbrockar och handskar, för att säkerställa din hälsa och säkerhet!
