Rnase A
Ribonukleas A (RNaseA) är en enkelsträngad polypeptid som innehåller 4 disulfidbindningar med en molekylvikt på cirka 13,7 kDa.RNas A är ett endoribonukleas som specifikt bryter ned enkelsträngat RNA vid C- och U-rester.Specifikt känner klyvningen igen fosfodiesterbindningen som bildas av 5'-ribosen i en nukleotid och fosfatgruppen på 3'-ribosen av den intilliggande pyrimidinnukleotiden, så att de 2,3'-cykliska fosfaterna hydrolyseras till motsvarande 3 ′nukleosidfosfater (t.ex. pG-pG-pC-pA-pG klyvs av RNas A för att generera pG-pG-pCp och A-PG).RNas A är det mest aktiva vid klyvning av enkelsträngat RNA.Rekommenderad arbetskoncentration är 1-100μG/mL, kompatibel med olika reaktionssystem.Låg saltkoncentration (0-100 mM NaCl) kan användas för att skära enkelsträngat RNA, dubbelsträngat RNA och RNA-kedjor som bildas genom RNA-DNA-hybridisering.Men vid hög saltkoncentration (≥0,3 M), klyver RNas A endast specifikt enkelsträngat RNA.
RNas A används oftast för att avlägsna RNA under beredningen av plasmid-DNA eller genomiskt DNA. Huruvida DNas är aktivt under beredningsprocessen kan lätt påverka reaktionen.Den traditionella metoden att koka i ett vattenbad kan användas för att inaktivera DNas-aktivitet.Denna produkt innehåller inte DNas och proteas och kräver ingen värmebehandling före användning.Dessutom kan denna produkt också användas i molekylärbiologiska experiment som RNas-skyddsanalys och RNA-sekvensanalys.
Förvaringsförhållanden
Produkten kan förvaras vid -25～-15℃, giltig i 2 år.
Instruktioner
Detta är en av de vanligaste metoderna för att förbereda RNase A-lagringslösning.Den kan också förberedas avandra metoder enligt de traditionella metoderna i laboratoriet eller referenslitteraturen (t.exdirekt upplösning i 10 mM Tris-HCl, pH 7,5 eller Tris-NaCl-lösning)
1. Använd 10 mM natriumacetat (pH 5,2) för att bereda 10 mg/mL RNase A-lagringslösning
2. Värmning vid 100 ℃ i 15 min
3. Kyl till rumstemperatur, tillsätt 1/10 volym av 1 M Tris-HCl (pH 7,4), justera dess pH till 7,4 (förtillsätt till exempel 500 ml 10 g/ml RNase-lagringslösning 1M Tris-HCL, PH7.4)
4. Underförpackad vid -20 ℃ för frysförvaring, som kan vara stabil i upp till 2 år.
[Anmärkningar]: Vid kokning av RNaseA-lösning under neutrala förhållanden kommer RNas-utfällning att bildas;Koka det vid ett lägre pH, och om det finns utfällning kan det observeras, vilket kan orsakas av närvaron av proteinföroreningar.Om sediment hittas efter kokning kan föroreningar avlägsnas genom höghastighetscentrifugering (13000 rpm) och sedan underpackas för frysförvaring.
Produktinformation
| Synonymer | ribonukleas I;Pankreatisk ribonukleas;Ribonukleas 3'-pyrimidnooligonukleotidohydrolas;rnas A;Endoribonulceas I |
| CAS-nr. | 9001-99-4 |
| Utseende | Vitt lyofiliserat pulver |
| Molekylvikt | ~ 13,7 kDa (aminosyrasekvens) |
| PH värde | 7,6 (aktivitetsområde 6-10) |
| Lämplig temperatur | 60 ℃ (aktivitetsområde 15-70 ℃) |
| Aktiverande agent | Na2+.K+ |
| Inhibitor | RNAshämmare |
| Inaktiveringsmetod | Kan inte inaktiveras genom uppvärmning, det rekommenderas att använda centrifugkolonn |
| Ursprung | Bovin |
| Löslighet | Lösligt i vatten (10mg/ml) |
| Förlust på torrt | ≤5,0 % |
| Enzymaktivitet | ≥60 Kunitz-enheter/mg |
| Isoelektrisk punkt | 9.6 |
Anteckningar
För din säkerhet och hälsa, vänligen bär laboratorierockar och engångshandskar vid användning.
