One Step RT-qPCR SYBR Green Premix
Kat.nr: HCB5140A
One Step RT-qPCR Syber Green Premix är för fluorescenskvantifiering baserad på SYBR Green I-färgämne.Med hjälp av genspecifika primrar fullbordas omvänd transkription och qPCR-reaktioner i ett rör, vilket eliminerar behovet av upprepade locköppnings- och pipetteringsoperationer, vilket avsevärt förbättrar analyseffektiviteten och minskar risken för kontaminering.För RNA-prover använder kitet värmebeständigt omvänt transkriptas för effektiv cDNA-syntes och HotStart Taq DNA-polymeras för kvantitativ amplifiering.Under det optimerade buffertsystemet kan kitets känslighet vara så hög som 0,1 pg för högt uttryckta mål och så hög som 1 pg för måttligt uttryckta mål.Satsen är lämplig för amplifiering och kvantifiering av DNA-prover.Det möjliggör känslig detektering och kvantifiering av nukleinsyror från olika växt- och djurprover, celler och mikroorganismer.
Komponenter
| No | namn | Volym | Volym |
| 1 | Avancerad buffert | 250 μL | 2×1,25 ml |
| 2 | Avancerad enzymblandning | 20 μL | 200 μL |
| 3 | RNase-fri H2O | 250 μL | 2×1,25 ml |
Förvaringsförhållanden
Denna produkt bör förvaras vid -25~-15℃ borta från ljus i 1 år.
Instruktioner
1. Reaktionssystemkonfigurationd
| Komponenter | Volym (μL) | Volym (μL) | Slutlig koncentration |
| Avancerad buffert | 12.5 | 25 | 1× |
| Avancerad enzymblandning | 1 | 2 | - |
| Forward Primer (10 μmol/L)a | 0,5 | 1 | 0,2 μmol/L |
| Omvänd primer (10 μmol/L)a | 0,5 | 1 | 0,2 μmol/L |
| RNA Tamplateb | X | X | - |
| RNase-fri H2Oc | till 25 | till 50 | - |
Anmärkningar:
1) a.TDen slutliga primerkoncentrationen var 0,2 μmol/L, vilket också kunde justeras mellan 0,1 och 1 μmol/L efter behov.
2) b.Reagenset är extremt känsligt, med totalt RNA i intervallet 1pg-1μg, och testning av humana prover visade en optimal inmatning på 1 pg-100 ng, vilket kontrollerade för ett totalt Ct-värde i intervallet 15-30 som lämpligt.
3) c.Det rekommenderas att använda 20 μL eller 50 μL för att säkerställa validiteten och reproducerbarheten av målgenamplifieringen.
4) d.Förbered dig i den ultrarena bänken och använd nukleasresterfria spetsar och reaktionsrör;spetsar med filterpatroner rekommenderas.Undvik korskontaminering och aerosolkontamination.
2.Reaktionsprogram
| Cykelsteg | Temp. | Tid | Cyklar |
| Omvänd transkription | 50 ℃a | 6 min | 1 |
| Initial denaturering | 95 ℃ | 5 min | 1 |
| Amplifieringsreaktion | 95 ℃ | 15 sek | 40 |
| 60 ℃b | 30 sek | ||
| Smältkurva skede | Instrumentets standardinställningar | 1 | |
Anmärkningar:
1) a.Temperaturen för omvänd transkription kan väljas mellan 50-55°C enligt de experimentella behoven.För DNA-prover kan den omvända transkriptionsprocessen utelämnas.
2) b.I speciella fall kan glödgnings-/förlängningstemperaturen justeras enligt primerns Tm-värde, 60°C rekommenderas.
Anteckningar
1. Denna produkt är endast avsedd för forskning.
2. Använd labbrockar och engångshandskar för din säkerhet.
