One Step Fast RT-qPCR Probe Premix-UNG
Kat.nr: HCR5143A
One Step RT-qPCR Probe Kit (FOR FAST) är ett sondbaserat RT-qPCR snabbdetekteringskit lämpligt för enkelplex eller multiplex kvantitativ PCR med RNA som mall (som RNA-virus).Denna produkt använder en ny generation av antikroppsmodifierat Taq DNA-polymeras och ettstegsdedikerat omvänt transkriptas, med en optimerad buffert för snabb amplifiering, som har snabbare amplifieringshastighet, högre amplifieringseffektivitet och specificitet.Den stöder balanserad amplifiering i både single-plex och multiplex av låg- och högkoncentrationsprover på kort tid.
Komponenter
1. 5×RT-qPCR-buffert (U+)
2. Enzymblandning (U+)
Anmärkningar:
a.5×RT-qPCR-buffert (U+) inkluderar dNTP och Mg2+;
b.Enzymmix (U+) inkluderar omvänt transkriptas, Hot Start Taq DNA-polymeras, RNas-hämmare och UDG;
c.Använd RNase-fria tips, EP-rör etc.
Blanda 5×RT-qPCR-bufferten (U+) noggrant före användning.Om det finns någon utfällning efter upptining, vänta tills bufferten återgår till rumstemperatur, blanda och lös upp och använd dem sedan normalt.
Förvaringsförhållanden
Produkten levereras med torris och kan lagras vid -25~-15℃ i 1 år.
Instruktioner
1. Reaktion Systemet
| Komponenter | Volym (20 μL reaktion) |
| 2 × RT-qPCR-buffert | 4 μL |
| Enzymmix (U+) | 0,8 μL |
| Primer Forward | 0,1~ 1,0μM |
| Primer omvänd | 0,1~ 1,0μM |
| TaqMan-sond | 0,05~0,25μM |
| Mall | X μL |
| RNase-fritt vatten | upp till 25μL |
Anmärkningar: Reaktionsvolymen är 10-50μL.
2. Cykelprotokoll (Standard)
| Cykel steg | Temp. | Tid | Cyklar |
| Omvänd transkription | 55 ℃ | 10 minuter | 1 |
| Initial denaturering | 95 ℃ | 30 sek | 1 |
| Denaturering | 95 ℃ | 10 sek | 45 |
| Glödgning/förlängning | 60 ℃ | 30 sek |
| Cykelprotokoll (Snabb) Cykel steg |
Temp. |
Tid |
Cyklar |
| Omvänd transkription | 55 ℃ | 5 min | 1 |
| Initial denaturering | 95 ℃ | 5 s | 1 |
| Denaturering | 95 ℃ | 3 s | 43 |
| Glödgning/förlängning | 60 ℃ | 10 s |
Anmärkningar:
a.Temperaturen för omvänd transkription är mellan 50 ℃ till 60 ℃, att öka temperaturen hjälper till att förstärka komplexa strukturer och mallar med högt CG-innehåll;
b.Den optimala glödgningstemperaturen måste justeras baserat på primerns Tm-värde, och välj den kortaste tiden för fluorescenssignalinsamling baserat på realtids-PCR-instrumentet.
Anteckningar
Vänligen använd nödvändig personlig skyddsutrustning, såsom labbrock och handskar, för att säkerställa din hälsa och säkerhet!
