Multiplex qPCR Probe Premix
Kat.nr: HCB5051A
TaqMan multiplex qPCR Master Mix (Dye Based) är en förlösning för 2 × realtids kvantitativ PCR-amplifiering kännetecknad av hög känslighet och specificitet, som är blå till färgen, och har effekten av provtillsats.Denna produkt är ett 2× Mix förblandat reagens som möjliggör upp till fyra fluorescerande kvantitativa PCR-reaktioner i en enda reaktionsbrunn.Denna produkt innehåller den genetiskt modifierade antikroppsmetoden för att varmstarta Taq-enzymet, vilket avsevärt förbättrar amplifieringskänsligheten och specificiteten.Samtidigt har denna produkt djupt optimerat multireaktionsbufferten, vilket kan förbättra reaktionens amplifieringseffektivitet och främja effektiv amplifiering av mallar med låg koncentration.Denna produkt kan användas för genotypning och multiplex kvantitativ analys.
Specifikation
| Hot Start | Inbyggd varmstart |
| Detektionsmetod | Primer-probe-detektion |
| PCR-metod | qPCR |
| Polymeras | Taq DNA-polymeras |
| Typ av prov | DNA |
Förvaringsförhållanden
Produkten levereras med torris och kan lagras vid -25~-15 ℃ i 2 år.
Instruktioner
1. ReaktionSystemet
| Komponenter | Volym (μL) | Slutlig koncentration |
| 2× TaqMan multiplex qPCR Master Mix | 12.5 | 1× |
| Primermix (10 μmol/L) a | × | 0,1 - 0,5 μmol/L |
| Sondblandning (10 μmol/L)b | × | 50 - 250 nmol/L |
| Rox referensfärgämne | 0,5 | 1× |
| Mall-DNA/cDNA | 1-10 | - |
| ddH2O | upp till 25 | - |
Anmärkningar:Blanda noggrant före användning för att undvika alltför stora bubblor från kraftig skakning.
a.Primerkoncentration: Primer Mix innehåller flera par primers, vanligtvis varje primer med en slutkoncentration på 0,2 μmol/L och kan även justeras mellan 0,1 och 0,5 μmol/L efter behov.
b.Sondkoncentration: Probe Mix innehåller flera prober med olika fluorescenssignaler, och koncentrationen av varje sond kan justeras mellan 50 och 250 nmol/L beroende på specifik situation.
1.Rox-färgämnesreferens: Den används på realtids-PCR-amplifieringsinstrument som Applied Biosystems för att korrigera felet i fluorescenssignalen som genereras mellan brunnar;denna produkt innehåller inte Rox färgämnesreferens.Cas#10200 rekommenderas vid behov.
2.Mallutspädning: qPCR är mycket känslig och det rekommenderas att späda mallen för användning.Om mallen är en cDNA-stamlösning bör mallvolymen inte överstiga 1/10 av den totala volymen.
3.Reaktionssystem: 25μL, 30μL eller 50 μL rekommenderas för att säkerställa effektiviteten och repeterbarheten av målgenamplifieringen.
4.Systemförberedelse: Förbered i den superrena bänken och använd spetsarna och reaktionsrören utan nukleasrester;det rekommenderas att använda spetsarna med filterpatroner.Undvik korskontaminering och aerosolkontamination.
2.Reaktionsprogram
| Cykelsteg | Temp. | Tid | Cyklar |
| Initial-denaturering | 95 ℃ | 5 min | 1 |
| Denaturering | 95 ℃ | 15 sek | 45 |
| Glödgning/förlängning | 60 ℃ | 30 sek |
Anmärkningar:
1.Glödgning/förlängning: Temperaturen och tiden kan justeras på lämpligt sätt enligt det designade primer-Tm-värdet.
2.Fluorescenssignalförvärvning: Den fluorescenssignalinsamlingstid som krävs för olika qPCR-detektionsinstrument är olika, vänligen ställ in enligt minimitidsgränsen.Tiden för flera vanliga instrument är inställd enligt följande:
20 sek: Applied Biosystems 7700, 7900HT, 7500 Fast
31 sek: Applied Biosystems 7300
32 sek: Applied Biosystems 7500
Anteckningar
Vänligen använd nödvändig personlig skyddsutrustning, såsom labbrock och handskar, för att säkerställa din hälsa och säkerhet!
