Hotstart Taq DNA Polymerase
Hot Start Taq DNA-polymeras (antikroppsmodifiering) är ett varmstartat termostabilt DNA-polymeras från Thermus aquaticus YT-1， som har en 5′→3′-polymerasaktivitet och en 5′-fliksendonukleasaktivitet.Hotstart Taq DNA-polymeras är ett Taq DNA-polymeras som modifierats av termolabila Taq-antikroppar.Antikroppsmodifiering ökade specificitet, känslighet och utbyte av PCR.
Komponenter
| Komponent | HC1012A-01 | HC1012A-02 | HC1012A-03 | HC1012A-04 |
| 5×HC Taq-buffert | 4×1 ml | 4×10 ml | 4×50 ml | 5×400 ml |
| Hot Start Taq DNA-polymeras (antikroppsmodifierad) (5 U/μL) | 0,1 ml | 1 ml | 5 ml | 10×5 ml |
Ansökningar
10 mM Tris-HCl (pH 7,4 vid 25°C), 100 mM KCl, 0,1 mM EDTA, 1 mM ditiotreitol, 0,5 % Tween20, 0,5 % IGEPALCA-630 och 50 % glycerol.
Lagringstillstånd
Transport under 0°C och förvaras vid -25°C~-15°C.
Enhetsdefinition
En enhet definieras som mängden enzym som införlivar 15 nmol dNTP i syraolösligt material på 30 minuter vid 75°C.
Kvalitetskontroll
1.Endonuclease-aktivitet:Inkubation av 20 U enzym med 4 μg pUC19 DNA under 4 timmar vid 37 ℃ resulterade i ingen detekterbar nedbrytning av DNA:t som bestämts med gelelektrofores.
2.5 kb Lambda PCR:25 cykler av PCR-amplifiering av 5 ng lambda-DNA med 1,25 enheter Taq DNA-polymeras i närvaro av 200 µM dNTP och 0,2 µM primers resulterar i den förväntade 5 kb-produkten.
3.Exonukleasaktivitet:Inkubation av en 50 µl reaktion innehållande minst 12,5 U Taq DNA-polymeras med 10 nmol 5´-FAM-oligonukleotid under 30 minuter vid 37 ℃ ger ingen detekterbar nedbrytning.
4.RNase-aktivitet:Inkubation av 10 µL reaktion innehållande 20 U enzym med 1 μg RNA-transkript under 2 timmar vid 37°C resulterade i ingen detekterbar nedbrytning av RNA:t som bestämts med gelelektrofores.
5.Värmeinaktivering:Nej.
Reaktionssystem
| Komponenter | Volym |
| Mall-DNAa | frivillig |
| 10 μM Forward Primer | 0,5 μL |
| 10 μM Reverse Primer | 0,5 μL |
| dNTP-mix (10 mM vardera) | 0,5 μL |
| 5×HC Taq-buffert | 5 μL |
| Taq DNA-polymerasb(5U/μL) | 0,125 μL |
| Nukleasfritt vatten | Upp till 25 μL |
Anmärkningar:
1) a.
| DNA | Belopp |
| Genomisk | 1 ng-1 μg |
| Plasmid eller viral | 1 pg-1 ng |
2) b.Den optimala koncentrationen av Taq DNA-polymeras kan variera från 5-50 enheter/ml (0,1-0,5 enheter/25 µL reaktion) i specialiserade tillämpningar.
Termiskt cykelprotokoll
PCR
| Steg | Temperatur(°C) | Tid | Cyklar |
| Initial denatureringa | 95 ℃ | 1-3 min | - |
| Denaturering | 95 ℃ | 15-30 s | 30-35 cykler |
| Glödgningb | 45-68 ℃ | 15-60 s | |
| Förlängning | 68 ℃ | 1 kb/min | |
| Slutlig förlängning | 68 ℃ | 5 min | - |
Anmärkningar:
1) En initial denaturering på 1 min vid 95°C är tillräcklig för de flesta amplifieringar.För svåra mallar rekommenderas en längre denaturering på 2-3 minuter vid 95°C.Med koloni-PCR rekommenderas en initial 5 minuters denaturering vid 95°C.
2) Glödgningssteget är typiskt 15-60 s.Glödgningstemperaturen baseras på Tm för primerparet och är vanligtvis 45-68 ℃.
