DNas I (Rnasfri) (5u/ul)
Kat.nr: HC4007A
DNas I (deoxiribonukleas I) är ett endodeoxiribonukleas som kan smälta enkel- eller dubbelsträngat DNA.Den känner igen och klyver fosfodiesterbindningar för att producera monodeoxinukleotider eller enkel- eller dubbelsträngade oligodeoxinukleotider med fosfatgrupper vid 5'-terminalen och hydroxyl vid 3'-terminalen.Aktiviteten av DNas I beror på Ca2+och kan aktiveras av tvåvärda metalljoner såsom Mn2+och Zn2+.5 mM Ca2+skyddar enzymet från hydrolys.I närvaro av Mg2+, kunde enzymet slumpmässigt känna igen och klyva vilken plats som helst på vilken DNA-sträng som helst.I närvaro av Mn2+, kan de dubbla strängarna av DNA samtidigt kännas igen och klyvas på nästan samma ställe för att bilda DNA-fragment med platt ände eller DNA-fragment med klibbiga ändar med 1-2 nukleotider som sticker ut.
Komponenter
| namn | 0,1 KU | 1KU | 5 KU | 50 KU |
| DNas I, RNas-fri | 20 μL | 200 μL | 1 ml | 10 ml |
| 10×DNase I-buffert | 1 ml | 1 ml | 5 × 1 ml | 5 x 10 ml |
Förvaringsförhållanden
-25℃~-15℃ för förvaring;Transport under ispåsar.
Instruktioner
1. Förbered reaktionslösningen i det RNasfria röret enligt proportionerna nedan:
| Komponent | Volym |
| RNA | X ug |
| 10 × DNase I-buffert | 1 μL |
| DNas I, RNas-fri (5U/μL) | 1 U per µg RNA① |
| ddH2O | Upp till 10μL |
Obs: ① Beräkna volymen av DNas I som behöver tillsättas baserat på mängden RNA.
2. 37 ℃ i 15 minuter;
3. Tillsätt 0,5 M EDTA till den slutliga koncentrationen på 2,5 mM~5 mM och värm vid 65 ℃ i 10 minuter för att stoppa reaktionen.Provet kan användas direkt för nästa reaktion, såsom omvänd transkriptionexperimentera.
Enhetsdefinition
En enhet definieras som mängden enzym som fullständigt kommer att bryta ned 1 µg pBR322DNA på 10 minuter vid 37℃.
Kvalitetskontroll
RNase:5U DNas I med 1,6 µg MS2 RNA under 4 timmar vid 37 ℃ ger ingen nedbrytning eftersombestäms genom agarosgelelektrofores.
Anteckningar
1. Förbered 0,5MEDTA själv.
2. Använd 1U DNas I per µg RNA.Men om RNA är mindre än 1 µg, använd 1U DNas I.
3. Placera enzymet på is under drift.
