BspQI
BspQI kan uttryckas rekombinant i E. coli som kan känna igen specifika ställen och produceras under
BspQI, ett IIs-restriktionsendonukleasrestriktionsendonukleas, härrör från en rekombinant E. coli-stam som bär den klonade och modifierade BspQI-genen från Bacillus sphaericus.Den kan känna igen specifika ställen, och igenkänningssekvensen och klyvningsställena är som följer:
5' · · · ·GCTCTTC(N) · · · · · · · · · · ·3'
3' · · · · CGAGAAG(NNNN) · · · · 5'
Produktfunktioner
1. Hög aktivitet, snabb matsmältning;
2. Låg stjärnaktivitet, säkerställer exakt skärning som "skalpell";
3. Utan BSA och fri från animaliskt ursprung;
Metyleringskänslighet
Dam metylering:Inte känslig;
Dcm metylering:Inte känslig;
CpG-metylering:Inte känslig;
Förvaringsförhållanden
Produkten ska skickas ≤ 0 ℃;Förvaras i -25~- 15℃ tillstånd.
Lagringsbuffert
20 mM Tris-HCl, 0,1 mM EDTA, 500 mM KCl, 1,0 mM ditiotreitol, 500 µg/ml rekombinant albumin, 0,1 % Trition X-100 och 50 % glycerol (pH 7,0 vid 25°C).
Enhetsdefinition
En enhet definieras som mängden enzym som krävs för att smälta 1 µg intern kontroll-DNA på 1 timme vid 50°C i en total reaktionsvolym på 50 µL.
Kvalitetskontroll
Proteinrenhetsanalys (SDS-PAGE):Renheten hos BspQI var ≥95 % bestämd med SDS-PAGE-analys.
RNase:10U BspQI med 1,6 μg MS2 RNA under 4 timmar vid 50 ℃ ger ingen nedbrytning, bestämt med agarosgelelektrofores.
Icke-specifik DNas-aktivitet:10U BspQI med 1μg λ DNA vid 50 ℃ under 16 timmar, jämfört med 50 ℃ under 1 timme, ger inget överskott av DNA, bestämt med agarosgelelektrofores.
Ligering och återskärning:Efter digerering av 1 μg λDNA med 10U BspQI kan DNA-fragment ligeras med T4 DNA-ligas vid 16ºC.Och dessa ligerade fragment kan skäras om med BspQI.
E coli DNA: E. coli 16s rDNA-specifik TaqMan qPCR-detektion visade att E.coli-genomrest ≤ 0,1 pg/ul.
Värdproteinrester:≤ 50 ppm
Bakteriell Endotoxin: LAL-test, enligt Chinese Pharmacopoeia IV 2020-utgåvan, gelgränstestmetod, allmän regel (1143).Bakteriell endotoxinhalt bör vara ≤10 EU/mg.
Reaktionssystem och förhållanden
| Komponent | Volym |
| BspQ I(10 U/μL) | 1 μL |
| DNA | 1 μg |
| 10 x BspQ I-buffert | 5 μL |
| dd H2O | Upp till 50 μL |
Reaktionsförhållanden: 50 ℃, 1-16 h.
Värmeinaktivering:80°C i 20 min.
Det rekommenderade reaktionssystemet och betingelserna kan ge relativt god enzymnedbrytningseffekt, vilket endast är avsett för referens, se experimentresultaten för detaljer.
Produktapplikation
Restriktion endonukleas digestion, snabb kloning.
Anteckningar
1. Volymen enzym ≤ 1/10 av reaktionsvolymen.
2. Stjärnaktivitet kan uppstå när glycerolkoncentrationen är mer än 5 %.
3. Klyvningsaktivitet kan uppstå när substratet understiger det rekommenderade förhållandet.
