Ultra Nuclease
UltraNuclease är en genetiskt modifierad endonuklaes som härrör från Serratia marcescens, som kan bryta ner DNA eller RNA, antingen dubbel- eller enkelsträngat, linjärt eller cirkulärt under ett brett spektrum av tillstånd, fullständigt bryta ner nukleinsyror till 5'-monofosfat-oligonukleotider med 3-5 baslängder. .Efter genteknisk modifiering fermenterades, uttrycktes och renades produkten i Escherichia coli (E. coli), vilket minskar viskositeten hos cellsupernatanten och cellysat vetenskaplig forskning, men också förbättrar reningseffektiviteten och funktionell forskning av protein.Det kan också användas i genterapi, virusrening, vaccinproduktion, protein- och polysackaridläkemedelsindustrin som ett reagens för borttagning av värdrester av nukleinsyra.
Produktfunktioner
| CAS-nr. | 9025-65-4 |
| EG nr. | |
| Molekylvikt | 30 kDa |
| Isoelektrisk punkt | 6,85 |
| Proteinrenhet | ≥99%（SDS-PAGE & SEC-HPLC） |
| Specifik aktivitet | ≥1.1×106 U/mg |
| OptimalTemperatur | 37°C |
| Optimalt pH | 8,0 |
| ProteaseActivity | negativ |
| Biobörda | ＜10CFU/100 000U |
| Resterande värdcellsprotein | ≤10 ppm |
| Tungmetall | ≤10 ppm |
| Bakteriellt endotoxin | ＜0,25EU/1000U |
| Förvaringsbuffert | 20 mM Tris-HCl, pH 8,0, 2 mM MgCl2 ， 20 mM NaCl, 50% glycerol |
Förvaringsförhållanden
≤0°C transport；-25~-15°C Lagring, 2 års giltighet (undvik frysning-upptining).
Enhetsdefinition
Mängden enzym som användes för att ändra absorptionsvärdet för △A260 med 1,0 inom 30 minuter vid 37 °C, pH 8,0, motsvarande smält 37 μg laxsperma-DNA genom att skära i oligonukleotider, definierades som en aktiv enhet (U).
Kvalitetskontroll
Resterande värdcellsprotein: ELISA kit
•Proteas Rester: 250KU/mL UltraNuclease reagerade med substrat i 60 minuter, ingen aktivitet detekterades.
•Bakteriellt endotoxin: LAL-Test, Pharmacopoeia of the People's Republic of China Volym 4 (2020 Edition) gelgränstestmetod.Allmänna regler (1143).
•Biobelastning: Folkrepubliken Kinas farmakopé Volym 4 (2020-utgåvan)— Allmänt
Regler för sterilitetstest (1101), PRC National Standard, GB 4789.2-2016.
•Tungmetall:ICP-AES, HJ776-2015.
Drift
UltraNuclease-aktiviteten hämmades signifikant när SDS-koncentrationen var över 0,1 % eller EDTA
koncentrationen var över 1 mM. Ytaktivt ämne Triton X-100, Tween 20 och Tween 80 hade ingen effekt på nukleas
egenskaper när koncentrationen var under 1,5 %.
| Drift | Optimal drift | Giltig operation |
| Temperatur | 37℃ | 0-45 ℃ |
| pH | 8,0-9,2 | 6,0-11,0 |
| Mg2+ | 1-2 mM | 1-15 mM |
| DTT | 0-100 mM | >100mM |
| 2-merkaptoetanol | 0-100 mM | >100mM |
| Monovalent metalljon （Na+, K+ etc.) | 0-20 mM | 0-200 mM |
| PO43- | 0-10 mM | 0-100 mM |
Användning och dosering
• Ta bort exogen nukleinsyra från vaccinprodukter, minska risken för kvarvarande nukleinsyratoxicitet och förbättra produktsäkerheten.
• Minska viskositeten hos fodervätskan orsakad av nukleinsyra, förkorta bearbetningstiden och öka proteinutbytet.
• Ta bort nukleinsyran som lindade partikeln (virus, inklusionskropp, etc.), vilket främjar
till frisättning och rening av partikeln.
| Experimentell typ | Proteinproduktion | Virus, vaccin | Celldroger |
| Cellnummer | 1g cell våtvikt (återsuspenderad med 10 ml buffert) | 1L jäsning flytande supernatant | 1L kultur |
| Minsta dos | 250U | 100U | 100U |
| Rekommenderad dosering | 2500U | 25 000 U | 5000U |
• Nukleasbehandling kan förbättra upplösningen och återvinningen av provet för kolonnkromatografi, elektrofores och blottinganalys.
• Vid genterapi avlägsnas nukleinsyra för att erhålla renade adenoassocierade virus.
