Fosfatas alkalisk (ALP)
Beskrivning
Alkaliskt fosfatas härrör från en rekombinant E. coli-stam som bär TAB5-genen.Enzymet katalyserar defosforyleringen av 5´- och 3´-ändarna av DNA- och RNA-fosfomonoestrar.Det hydrolyserar också ribos, såväl som deoxiribonukleosidtrifosfater (NTP och dNTP).TAB5 Alkaline Phosphatase verkar på 5' utskjutande, 5' försänkta och trubbiga ändar.Fosfataset kan användas i många molekylärbiologiska tillämpningar, såsom kloning eller märkning av probändar för att avlägsna de fosforylerade ändarna av DNA eller RNA.I kloningsexperiment förhindrar defosforylering det linjäriserade plasmid-DNA från självligering.Det kan också bryta ned oinkorporerade dNTP i PCR-reaktioner för att förbereda en mall för DNA-sekvensering.Enzymet inaktiveras fullständigt och irreversibelt genom upphettning vid 70°C i 5 minuter, vilket gör att borttagning av fosfataset före ligering eller slutmärkning blir onödigt.
Användande
1.Alkaliskt fosfatas kopplat till proteiner (antikroppar, streptavidin etc.) kan specifikt identifiera målmolekyler och kan användas i ELISA, WB och histokemisk detektion;
2.Alkaliskt fosfatas kan användas för att avfosforisera 5'-terminalen av DNA eller RNA för att förhindra självlänkning;
3. Ovanstående defosforylerade DNA eller RNA kan märkas med radiomärkta fosfater (via T4 polynukleotidkinas)
Kemisk struktur
Specifikation
| Testföremål | Specifikationer |
| Enzymaktivitet | 5 U/μL |
| Endonukleasaktivitet | Inte upptäckt |
| Exonuukleasaktivitet | Inte upptäckt |
| Nicking-aktivitet | Inte upptäckt |
| RNase-aktivitet | Inte upptäckt |
| E. coli DNA | ≤1 kopia/5U |
| Endotoxin | LAL-test, ≤10EU/mg |
| Renhet | ≥95 % |
Transport och förvaring
Transport:Omgivande
Förvaring:Förvaras vid 2-8°C
Rekommenderat omtestLiv:2 år
