DNas I
DNas I (deoxiribonukleas I) är ett endodeoxiribonukleas som kan smälta enkel- eller dubbelsträngat DNA.Den känner igen och klyver fosfodiesterbindningar för att producera monodeoxinukleotider eller enkel- eller dubbelsträngade oligodeoxinukleotider med fosfatgrupper vid 5'-terminalen och hydroxyl vid 3'-terminalen.Aktiviteten av DNas I beror på Ca2+ och kan aktiveras av tvåvärda metalljoner såsom Mn2+ och Zn2+.5mM Ca2+ skyddar enzymet från hydrolys.I närvaro av Mg2+ kunde enzymet slumpmässigt känna igen och klyva vilken plats som helst på vilken DNA-sträng som helst.I närvaro av Mn2+ kan de dubbla strängarna av DNA samtidigt kännas igen och klyvas på nästan samma ställe för att bilda DNA-fragment med platt ände eller DNA-fragment med klibbiga ändar med 1-2 nukleotider som sticker ut.
Produktegendom
Bovin Pancreas DNas I uttrycktes i jästexpressionssystem och renades.
Componenter
| Komponent | Volym | |||
| 0,1 KU | 1KU | 5KU | 50KU | |
| DNas I, RNas-fri | 20 μL | 200 μL | 1 ml | 10 ml |
| 10×DNase I-buffert | 1 ml | 1 ml | 5 × 1 ml | 5 × 10 ml |
Transport och förvaring
1. Lagringsstabilitet: – 15℃~-25℃ för lagring;
2. Transportstabilitet: Transport under isförpackningar;
3. Levereras i: 10 mM Tris-HCl, 2 mM CaCl2, 50 % glycerol, pH 7,6 vid 25 ℃.
Enhetsdefinition
En enhet definieras som mängden enzym som fullständigt kommer att bryta ned 1 µg pBR322 DNA på 10 minuter vid 37°C.
Kvalitetskontroll
RNase:5U DNas I med 1,6 μg MS2 RNA under 4 timmar vid 37 ℃ ger ingen nedbrytning, bestämt med agarosgelelektrofores.
Bakteriell Endotoxin:LAL-test, enligt Chinese Pharmacopoeia IV 2020-utgåvan, gelgränstestmetod, allmän regel (1143).Bakteriell endotoxinhalt bör vara ≤10 EU/mg.
Användningsinstruktioner
1.Förbered reaktionslösningen i det RNasfria röret enligt proportionerna nedan:
| Komponent | Volym |
| RNA | X μg |
| 10 × DNase I-buffert | 1 μL |
| DNas I, RNas-fri (5U/μL) | 1 U per μg RNA |
| ddH2O | Upp till 10 μL |
2,37 ℃ i 15 minuter;
3. Tillsätt termineringsbufferten för att stoppa reaktionen och värm vid 65 ℃ i 10 minuter för att inaktivera DNas I. Provet kan användas direkt för nästa transkriptionsexperiment.
Anteckningar
1. Använd 1U DNas I per μg RNA, eller 1U DNas I för mindre än 1μg RNA.
2.EDTA bör tillsättas till en slutlig koncentration av 5 mM för att skydda RNA från att brytas ned under enzyminaktivering.
