CHO HCP ELISA Kit
En enstegs immunosorbent ELISA-metod används i denna analys.Prover som innehåller CHOK1 HCP reagerar samtidigt med HRP-märkt get-anti-CHOK1-antikropp och anti-CHOK1-antikropp belagd på ELISA-plattan, och bildar slutligen ett sandwichkomplex av fastfas-antikropp-HCP-märkt antikropp.Obunden antigen-antikropp kan avlägsnas genom att tvätta ELISA-plattan.TMB-substratet tillsätts till brunnen för tillräcklig reaktion.Färgutvecklingen stoppas efter tillsats av stopplösningen och OD eller absorbansvärdet för reaktionslösningen vid 450/650 nm avläses med en mikroplattläsare.OD-värdet eller absorbansvärdet är proportionellt mot HCP-halten i lösningen.Utifrån detta kan HCP-koncentrationen i lösningen beräknas enligt standardkurvan.
Ansökan
Detta kit används för att kvantitativt detektera innehållet av CHOK1-värdcellproteinrester i prover.
Componenter
| S/N | Komponent | Koncentration | Förvaringsförhållanden |
| 1 | CHOK1 HCP Standard | 0,5 mg/ml | ≤–20℃ |
| 2 | Anti-CHO HCP-HRP | 0,5 mg/ml | ≤–20℃, skydda mot ljus |
| 3 | TMB | NA | 2-8℃, skydda mot ljus |
| 4 | 20 × PBST 0,05 % | NA | 2-8℃ |
| 5 | Stoppa lösning | NA | RT |
| 6 | Mikroplattförseglare | NA | RT |
| 7 | BSA | NA | 2-8℃ |
| 8 | Förbeläggningsplattor med hög adsorption | NA | 2-8℃ |
Utrustning som behövs
| Förbrukningsmaterial / Utrustning | Tillverkning | Katalog |
| Mikroplattläsare | Molekylära enheter | Spectra Max M5, M5e eller motsvarande |
| Termomixer | Eppendorf | Eppendorf/5355, eller motsvarande |
| Vortex mixer | IKA | MS3 Digital, eller motsvarande |
Lagring och stabilitet
1.Transport vid -25~-15°C.
2.Lagringsförhållandena är som visas i tabell 1;komponenter 1-2 förvaras ≤–20°C, 5-6 förvaras RT,3、4、7、8 lagras vid 2-8℃;giltighetstiden är 12 månader.
Produktparametrar
1.Känslighet: 1ng/ml
2.Detektionsområde: 3-100 ng/ml
3.Precision: Intra-assay CV≤ 10%, inter-assay CV≤ 15%
4.HCP-täckning: >80 %
5.Specificitet: Detta kit är universellt eftersom det specifikt reagerar med CHOK1 HCP oberoende av reningsprocess.
Reagensberedning
1.PBST 0,05 %
Ta 15 ml 20×PBST 0,05%, utspädd i ddH2O, och fyllde upp till 300 ml.
2.1,0 % BSA
Ta 1 g BSA från flaskan och späd i 100 ml PBST 0,05 %, blanda väl tills det är helt upplöst och förvara vid 2-8°C.Den beredda spädningsbufferten är giltig i 7 dagar.Det rekommenderas att förbereda vid behov.
3.Detektionslösning 2μg/mL
Ta 48 μL 0,5 mg/ml Anti-CHO HCP-HRP och späd i 11 952 μL 1 % BSA för att erhålla en slutkoncentration på 2 μg/ml detektionslösning.
4.QC och beredning av CHOK1 HCP-standarder
| Rör Nej. | Original | Koncentration | Volym | 1 % BSA | total volym | Slutlig |
| A | Standard | 0,5 mg/ml | 10 | 490 | 500 | 10 000 |
| B | A | 10 000 | 50 | 450 | 500 | 1 000 |
| S1 | B | 1 000 | 50 | 450 | 500 | 100 |
| S2 | S1 | 100 | 300 | 100 | 400 | 75 |
| S3 | S2 | 75 | 200 | 175 | 375 | 40 |
| S4 | S3 | 40 | 150 | 350 | 500 | 12 |
| S5 | S4 | 12 | 200 | 200 | 400 | 6 |
| S6 | S5 | 6 | 200 | 200 | 400 | 3 |
| NC | NA | NA | NA | 200 | 200 | 0 |
| QC | S1 | 100 | 50 | 200 | 250 | 20 |
Tabell: Förberedelse av kvalitetskontroll och standarder
Analysförfarande
1.Förbered reagenserna enligt anvisningarna i "Reagensförberedelse" ovan.
2.Ta 50 μL standarder, prover och kvalitetskontroller (se tabell 3) i varje brunn, tillsätt sedan 100 μL detektionslösning (2 μg/ml);Täck plåten med förseglare och placera ELISA-plattan på termomixern.Inkubera vid 500 rpm, 25±3 ℃ i 2 timmar.
3.Vänd på mikroplattan i diskhon och kassera beläggningslösningen.Pipettera 300 μL PBST 0,05 % i varje brunn för att tvätta ELISA-plattan och kassera lösningen och upprepa tvättningen 3 gånger.Vänd upp plåten på en ren hushållspapper och klappa torr.
4.Tillsätt 100 μL TMB-substrat (se tabell 1) till varje brunn, förslut ELISA-plattan och inkubera i mörker vid 25±3 ℃ i 15 minuter.
5.Pipettera 100 μL stopplösning i varje brunn.
6.Mät absorbansen vid våglängden 450/650 nm med mikroplattläsare.
7.Analysera data med SoftMax eller motsvarande programvara.Rita standardkurvan genom att använda en logistisk regressionsmodell med fyra parametrar.
Exempel på standardkurva
OBS: Om koncentrationen av HCP i provet överstiger den övre gränsen för standardkurvan måste det spädas ordentligt med spädningsbuffert före testning.
ANMÄRKNINGAR
Stopplösningen är 2M svavelsyra, hantera med försiktighet för att undvika stänk!
